產(chǎn)品名稱：結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
英文簡稱：HCT-8 [HRT-18]細(xì)胞

貨號：LZ-X969479
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染，會嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細(xì)胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
膠紅酵母金剛烷;AdamantaneCD122/白介素2受體β鏈抗體

小紅酵母京尼平苷酸;Geniposidicac金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基CD3抗體

粘紅酵母金石蠶苷;PoliumosideCD33抗體（人）

粘紅酵母桔梗皂苷D;PlatycodinD念珠菌顯色培養(yǎng)基CD33抗體(大、小鼠）

膜醭畢赤酵母金絲桃苷;HyperosideCD34抗體（表面的唾液粘蛋白）

伯頓畢赤酵母雞II型膠原蛋白;培養(yǎng)基CD38抗體（人）

菅囊酵母L-精氨酸;L(+)-Arginine大腸埃希氏菌O157顯色培養(yǎng)基CD4抗體

亞膜漢遜酵母積雪草酸;AsiaticacidCD7抗體

施氏漢遜酵母金雀花堿;Cytisine阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基CD8抗體

阿拉伯糖漢遜酵母姜黃素;CurcuminCD40L抗體

異常漢遜酵母己烯雌酚;Diethylstilbest尿道感染顯色培養(yǎng)基CD45(白共同抗原)抗體

異常漢遜酵母菊苣酸;Cichoricacid膜輔蛋白/內(nèi)源性輔助因子活性蛋白抗體(人)

異常漢遜酵母絞股藍(lán)皂苷XLIX;GypenosidemEI瓊脂基礎(chǔ)膜輔蛋白/內(nèi)源性輔助因子活性蛋白抗體

地霉屬絞股藍(lán)皂苷;GynostemmaPenCD45RO抗體

果香地霉5-O-甲基維斯阿米苷;5-O-Met培養(yǎng)基CD49(非常晚期抗原)抗體
HCT-8 [HRT-18]細(xì)胞纖溶酶原激活物抑制劑1 RNA結(jié)合蛋白抗體二乙二二乙 Diethylene Glycol Diethyl Ether >98.0%(GC)Human, Mouse, Rat

剪接因子，精氨/絲氨豐富19雙(2,4-二)二硫 Bis(2,4-dinitrophenyl) Disulfide >80.0%(LC)Human

可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體二硫化四秋蘭姆 Tetramethylthiuram Disulfide >97.0%(T)Human, Mouse, Rat

S腺苷L-同型半胱氨水解酶抗體N,N-二(2-羥乙)甘氨[生物研究用Good's緩沖液中的成分] N,N-Di(2-hydroxyethyl)glycine [Good's buffer component for biological research]>99.0%(T)Human, Mouse, Rat

磷化Smad2抗體N,N-二(2-羥乙)甘氨[生物研究用Good's緩沖液中的成分] N,N-Di(2-hydroxyethyl)glycine [Good's buffer component for biological research]>99.0%(T)Human, Mouse, Rat

磺酰脲類藥物受體1抗體N,N-二(2-羥乙)甘氨[生物研究用Good's緩沖液中的成分] N,N-Di(2-hydroxyethyl)glycine [Good's buffer component for biological research]>99.0%(T)Human, Rat

突觸泡蛋白2A抗體雙[4-(二氨)苯] Bis[4-(dimethylamino)phenyl]methane >98.0%(GC&T)Human, Mouse, Rat

突觸融合蛋白1抗體雙[4-(二氨)苯] Bis[4-(dimethylamino)phenyl]methane >98.0%(GC&T)Human

磷化核突觸蛋白α抗體賓雪德拉氏綠隱色 Bindschedler's Green Leuco Base >98.0%(LC&T)Human, Mouse, Rat