組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

?

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
硝基-L-氨酸MST4 Antibody4,二甲基環(huán)己酮,98%

N-酰-DL-氨酸Phospho-APP (Thr668) Antibody6-尿嘧啶

N-酰-DL-谷氨酸AMPA Receptor 4 (GluA 4) (Ala60) Antibody羥基金剛烷

DL-α-氨基己二酸,2-氨基己二酸AMPA Receptor 4 (GluA 4) (Arg860) Antibody5-甲基-羥基吡啶

DL-半胱氨酸鹽酸鹽，一水TORC2/CRTC2 Antibody2-氨基-5-溴-6-甲基吡啶

DL-胱氨酸鹽酸鹽Phospho-PKM2 (Tyr105) Antibody2,5-噻吩二羧酸

DL-胱氨酸Forskolin溴-甲酸

DL-組氨酸FAAH1 (C84F1) Rabbit mAb6-溴正己

DL-組氨酸鹽酸鹽GPNMB (E4D7P) XP® Rabbit mAb溴-甲

DL-高氨酸Phospho-PLD1 (Thr147) Antibody2-氨基-甲氧基甲酸

DL-高絲氨酸PLD1 Antibody2,二氫-1H-喹啉-酮

克里唑啼尼鹽酸;克里唑替尼鹽酸eIF6 (D16E9) XP® Rabbit mAb2-炔噻吩

DL-賴氨酸鹽酸鹽eIF6 (D16E9) XP® Rabbit mAb炔基溴化鎂

DL-正纈氨酸Phospho-PLD1 (Ser561) Antibody溴-1,1,1-三氟酮

DL-正纈氨酸GABA(B)R1 Antibody三(溴)

DL-焦谷氨酸EAAT2 Antibody4,6-二-5-硝基嘧啶

DL-叔亮氨酸GABA(B)R2 AntibodyN-甲基高哌

N-酰-DL-甲硫氨酸SNF2H (D4W6N) Rabbit mAbBROMO-2-METHOXYBENZALDEHYDE

補(bǔ)體AH50 ELISA試劑盒Alpha-Synuclein  核突觸蛋白-α100 ul

波形蛋白(VIM)ELISA試劑盒Alpha-Synuclein  核突觸蛋白100 ul

酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA試劑盒g(shù)amma Synuclein  核突觸蛋白-γ100 ul

二酸單酰輔酶A脫羧酶(MLYCD)ELISA試劑盒Syntaxin 1  突觸融合蛋白1100 ul

二酸單酰輔酶A(malonyl CoA)ELISA試劑盒SYT3  突觸結(jié)合蛋白3100 ul

二(MDA)ELISA試劑盒T3  *狀腺素T3100 ul

氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)ELISA試劑盒Synapsin I  神經(jīng)突觸素120 ul

別孕酮/3α,5α-四氫孕酮(AP/3α,5α-THP)ELISA試劑盒phospho-Synapsin I (Ser553)  酸化神經(jīng)突觸素1100 ul

表皮生長因子受體(EGFR)ELISA試劑盒phospho-Synapsin I (Ser9)  酸化神經(jīng)突觸素1100 ul
禽腺病毒(FADV)核酸試劑盒說明書血清白蛋白單克隆抗體Glycitin中文名：黃豆黃苷別名：分子式：C22H22O10

磷酸化絲狀肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體GB-1a中文名：別名：(-)-GB-1a分子式：C30H22O10

AEG-1抗體Epimedin B中文名：朝藿定B別名：分子式：C38H48O19

肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白2/3亞型1A抗體α-Naphthoflavone中文名：α-萘黃酮?jiǎng)e名：分子式：C19H12O2

錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白32抗體Epimedin C中文名：朝藿定C別名：分子式：C39H50O19